引物延伸设计方案[引物长度与延伸温度]

靶区域延伸区核苷酸序列位于扩增子核苷酸序列边界该引物设计方案，可以在单管内完成多重PCR，可以很好的降低非特性扩增。

50设计方法和常规引物设计一样，只需根据实验需求设置几个必要参数即可这里不进行演示2NCBI Primer blast。

PCR引物设计原则 1引物长度一般在1530bp 引物长度一般为1530bp，常用的为1827bp，但不应大于38bpReal Time PCR引物设计原则 Real Time PCR用引物与普通PCR引物设计要求不同常用的引物设计软件 “Primer premier”，“Oligo”，“Vector NTI Suit”，“DNAsis”。

二引物的设计原则引物设计有3条基本原则首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹。

好的引物会让 PCR 实验成功一半，引物设计一直都是PCR非常重要的环节然而，当实验室小白遇上引物设计，往往一片迷茫，不知。

按照上面讲的方法设计的引物扩增效率是有保证的，但是设计的引物特异性如何？引物的特异性又是什么？以新冠核酸检测为例，采集。

第二种设计方法叫intron inclusion，意思是保证正反向引物结合在不同的外显子上，从而使产物包含外显子的拼接位点如图所示对。

引物设计完成以后，应对其进行BLAST检测如果与其它基因不具有互补性，就可以进行下一步的实验了值得一提的是，各种模板的。

无扩增产物 现象 正对照有条带，而样品则无 原因 1模板含有抑制物非特异性扩增 现象 条带与预计的大小不一致或者非 特异性扩增带 原因 1引物特异性差 2模板拖尾 现象 产物在凝胶上呈Smear状态 原因 1模板不纯 2Buffer不合适 3退火温。

作者研究了此方法的通用性，即探究了寡核苷酸产物中非天然核苷酸相邻的核苷酸会如何影响非天然核苷酸的合成和错配后引物的延伸。